1. 預(yù)期用途
本試劑盒用于檢測血清、血漿中的人大別班達(dá)病毒IgM抗體，僅供研究使用，不得用于診斷。
2. 檢測原理
試劑盒采用捕獲法法原理：將抗人IgM-μ鏈抗體包被于酶標(biāo)板上，加入樣品，樣品中的IgM抗體被捕獲，結(jié)合形成“抗μ-IgM抗體"免疫復(fù)合物，清洗去除游離的雜質(zhì)，再加入HRP標(biāo)記的酶標(biāo)抗原，形成“抗μ-IgM抗體-酶標(biāo)抗原"夾心復(fù)合物，清洗去除多余的酶標(biāo)抗原，加入TMB顯色，再加入終止液，用酶標(biāo)儀在450 nm處測OD值，顏色的深淺和樣品中的待測抗體的濃度呈正比。
3. 包含的實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料
名 稱 Label | 組成成分 Kit Components | 數(shù)量（48T） Quantity | 數(shù)量（96T） Quantity |
酶標(biāo)板 | 包被板 | 8×6條 | 8×12條 |
陽性對(duì)照 | 陽性對(duì)照 | 1支×0.5mL | 1支×1mL |
陰性對(duì)照 | 陰性對(duì)照 | 1支×0.5mL | 1支×1mL |
酶標(biāo)記物 | HRP酶標(biāo)記重組抗原 | 1支×5mL | 1支×10mL |
樣品稀釋液 | PBS、BSA等 | 1支×5mL | 1支×10mL |
濃縮洗液（20×） | 20倍濃縮洗液 | 1支×15mL | 1支×25mL |
顯色劑 | TMB | 1支×6mL | 1支×10mL |
終止液 | 稀硫酸、抗沉淀劑 | 1支×3mL | 1支×6mL |
如需單獨(dú)采購通用型組分，請?zhí)峁?duì)應(yīng)的組分名稱。
4. 需要但未包含的實(shí)驗(yàn)材料
· 蒸餾水或去離子水，一次性離心管、一次性手套等耗材；
· 移液器、多通道移液器及配套槍頭；
· 燒杯、量筒、試劑瓶等容器具；
· 用于封貼微孔板的封板膜或其他替代材料；
· 微孔板振蕩器（如有需要）、離心機(jī)、旋渦振蕩器等輔助設(shè)備；
· 恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、酶標(biāo)儀、洗板機(jī)。
5. 試劑的準(zhǔn)備及儲(chǔ)存
· 試劑盒各組分應(yīng)儲(chǔ)存于2~8℃保存；
· 使用前請確保試劑盒按規(guī)定的條件儲(chǔ)存，每次實(shí)驗(yàn)僅準(zhǔn)備所需實(shí)驗(yàn)用量的試劑；
· 1×洗液的配制：濃縮洗液（20×）如有晶體析出，需在37℃下加熱至晶體全部溶解后使用。用蒸餾水1:20稀釋，例如：10mL濃縮洗滌液加入190mL的蒸餾水，混合均勻。配制好的洗液可以在室溫保存1周；
6. 樣品采集、預(yù)處理及儲(chǔ)存
下面列出的樣品收集和儲(chǔ)存條件旨在作為一般性指導(dǎo)，不同類型樣品的儲(chǔ)存、使用穩(wěn)定性尚未評(píng)估。
· 血清：使用血清采集管采集全血，室溫靜置待血細(xì)胞凝集后取的血清，或直接在1000×g下離心15分鐘取得血清。操作應(yīng)柔和，避免溶血發(fā)生。獲取的血清應(yīng)及時(shí)進(jìn)行檢測，如不能及時(shí)進(jìn)行檢測，應(yīng)等分為多份，儲(chǔ)存在-20℃及以下溫度條件，儲(chǔ)存時(shí)間不超過6個(gè)月，冷凍儲(chǔ)存血清樣品凍融不超過2次。
· 血漿：使用EDTA或肝素采血管收集血漿。全血采集后以1000×g離心15分鐘取得血漿。操作應(yīng)柔和，避免溶血發(fā)生。獲取的血漿應(yīng)及時(shí)進(jìn)行檢測，如不能及時(shí)進(jìn)行檢測，應(yīng)等分為多份，儲(chǔ)存在-20℃及以下溫度條件，儲(chǔ)存時(shí)間不超過6個(gè)月，冷凍儲(chǔ)存血漿樣品凍融不超過2次。
· 不能檢測含疊氮鈉、懸浮纖維蛋白或聚集物、重度溶血樣品。
· 樣品應(yīng)無微生物污染。
7. 實(shí)驗(yàn)步驟
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右，也可置于37℃溫箱快速回溫至室溫。
注意：酶標(biāo)板未恢復(fù)室溫前，請勿開封。
1 | 合理安排陽性對(duì)照孔、陰性對(duì)照孔、空白孔、樣品孔。 |
2 | 陽性對(duì)照孔加入陽性對(duì)照100uL，陰性對(duì)照孔加入陰性對(duì)照100uL。陰陽對(duì)照各設(shè)置2孔。 |
3 | 樣本孔先加入樣品稀釋液100uL，再加入樣本10uL。 空白孔不加樣品不加酶，其余操作與樣品孔相同。 |
4 | 蓋上封板膜，在37℃下孵育30分鐘。 |
5 | 洗板5次，最后一次洗板后棄去殘留洗液，倒扣酶標(biāo)板，在干凈的吸水紙上拍干。 |
6 | 每孔加入酶標(biāo)記物工作液100μL。 |
7 | 蓋上封板膜，在37℃下孵育30分鐘。 |
8 | 洗板5次，最后一次洗板后棄去殘留洗液，倒扣酶標(biāo)板，在干凈的吸水紙上拍干。 |
9 | 每孔加入顯色劑100uL. |
10 | 37℃下避光孵育15**分鐘。 |
11 | 每孔加入終止液50μL。 |
12 | 使用酶標(biāo)儀在450nm檢測波長及620~690nm參比波長條件下測定吸光度值，如果沒有參比波長則僅選擇450nm波長進(jìn)行檢測。如果最高濃度校準(zhǔn)品OD值過高，應(yīng)立即在405/630nm雙波長條件下檢測。 |
8. 陽性判斷值Cut-Off
Cut-Off =陰性對(duì)照孔平均OD值×2.1（陰性對(duì)照孔OD均值小于0.050時(shí)，按0.050計(jì)算）。
例：陰性對(duì)照孔平均OD值為0.100，則Cut-OFF值=0.100×2.1=0.210；
陰性對(duì)照孔平均OD值為0.020，則Cut-OFF值=0.050×2.1=0.105。
9. 結(jié)果判斷
陽性結(jié)果：樣本OD值＞Cut-OFF值，結(jié)果判為陽性；
陰性結(jié)果：樣本OD值≤Cut-OFF值，結(jié)果判為陰性；
10. 檢測的局限性
檢測結(jié)果無法進(jìn)行準(zhǔn)確判斷。本試劑為定性試劑，不能作為定量試劑使用。
11. 產(chǎn)品性能指標(biāo)
以下結(jié)果基于校準(zhǔn)品的濃度值實(shí)驗(yàn)得出，未納入基質(zhì)效應(yīng)等其他因素的潛在影響。
檢測3份企業(yè)陽性參考品，結(jié)果均為陽性。檢測3份企業(yè)陰性參考品，結(jié)果均為陰性。
精密度：板內(nèi)精密度CV＜10%（N=20），板間精密度CV＜15%（N=20）。
特異性（Analytical specificity）：其他相關(guān)因子在稀釋緩沖液中制備為10μg/mL測定，沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)。
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更新時(shí)間：2026-08-20 
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